2× ইউনিভার্সাল ব্লু GSK সবুজ QPCR মাস্টার মিক্স 40× হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার সহ

40×হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার সহ 2×ইউনিভার্সাল ব্লু GSK সবুজ qPCR মাস্টার মিক্স

2×Universal Blue GSK Green qPCR মাস্টার মিক্সের পরিচিতি:

এই পণ্যটি জিএসকে গ্রীন আই চিমেরিক ফ্লুরোসেন্স পদ্ধতি ব্যবহার করে qPCR-এর জন্য একটি 2x প্রিমিক্স সমাধান।মূল উপাদান, তাক ডিএনএ পলিমারেজ, একটি তাপ-সক্রিয় ডিএনএ পলিমারেজ অ্যান্টিবডি পদ্ধতি দ্বারা অবরুদ্ধ, যা নিম্ন তাপমাত্রার পরিস্থিতিতে অনির্দিষ্ট পরিবর্ধনকে কার্যকরভাবে বাধা দিতে পারে।ইতিমধ্যে, qPCR-এর জন্য অপ্টিমাইজ করা প্রতিক্রিয়া বাফারের সাথে মিলিত, Taq DNA পলিমারেজ উচ্চ নির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতা qPCR প্রতিক্রিয়ার জন্য খুব উপযুক্ত।একটি বিস্তৃত পরিমাণগত এলাকায় একটি ভাল স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা পাওয়া যেতে পারে, যা লক্ষ্য জিনের পরিমাণগত বিশ্লেষণের জন্য সঠিক, পুনরুত্পাদনযোগ্য এবং নির্ভরযোগ্য।একই সময়ে, এই পণ্যটিতে একটি বিশেষ ROX প্যাসিভ রেফারেন্স ডাই রয়েছে যা সমস্ত qPCR যন্ত্রে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত, এবং বিভিন্ন যন্ত্রে ROX ঘনত্ব সামঞ্জস্য করার প্রয়োজন নেই৷প্রিমিক্সে নীল রঞ্জক যোগ করা হয়, যার নমুনা যোগ করার ট্রেসার প্রভাব রয়েছে এবং একই সময়ে হলুদ টেমপ্লেট ডাইলুয়েন্ট প্রদান করা হয়।যখন টেমপ্লেটটি হলুদ টেমপ্লেট ডাইলুয়েন্ট দিয়ে মিশ্রিত করা হয় এবং নীল প্রতিক্রিয়া প্রিমিক্সে যোগ করা হয়, তখন রঙ নীল থেকে সবুজে পরিবর্তিত হয়, যা প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রক্রিয়ার প্রস্তুতিতে একটি ট্রেসার ভূমিকা পালন করতে পারে এবং ফুটো বা অপব্যবহার রোধ করতে পারে।নীল এবং হলুদ রঙের বর্ণালী কিউপিসিআর রঞ্জকগুলির সাথে ওভারল্যাপ করে না এবং প্রতিক্রিয়া ফলাফলকে প্রভাবিত করে না।

2×Universal Blue GSK Green qPCR মাস্টার মিক্সের পণ্যের তথ্য:

40×হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার সহ 2×ইউনিভার্সাল ব্লু গ্রিন qPCR মাস্টার মিক্স সহ স্টোরেজ এবং হ্যান্ডলিং শর্ত:

ভেজা বরফ ব্যাগ পরিবহন;-20 ℃ তাপমাত্রায় সংরক্ষিত, 12 মাসের জন্য বৈধ।

অ্যাসে প্রোটোকল / পদ্ধতি:

1. (ঐচ্ছিক) 2×ইউনিভার্সাল ব্লু জিএসকে গ্রিন qPCR মাস্টার মিক্সের টেমপ্লেট পাতলা করা:

এই কিটটি একটি 40x ইয়েলো টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার প্রদান করে, একটি 40-গুণ মিশ্রিত হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন যা তরলের রঙ পরিবর্তন করে qPCR প্রতিক্রিয়া তরলে টেমপ্লেট যোগ করা হয়েছে কিনা তা সঠিকভাবে নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।একটি উদাহরণ হিসাবে 20ul qPCR প্রতিক্রিয়া পদ্ধতি গ্রহণ করে, 20ul qPCR প্রতিক্রিয়া সমাধানে যোগ করা তরল টেমপ্লেট পরিমাণ অনুযায়ী, মূল টেমপ্লেটের সংশ্লিষ্ট তরল পদ্ধতিটি নিম্নলিখিত টেবিলে উল্লেখ করা যেতে পারে (উদাহরণ হিসাবে 100ul এ পাতলা করা আসল টেমপ্লেটটি গ্রহণ করা) ):

উদাহরণ:

2ul diluted টেমপ্লেট 20ul qPCR প্রতিক্রিয়া সিস্টেমে যোগ করা উচিত।

100ul টেমপ্লেট ডিলিউশন সিস্টেমকে উদাহরণ হিসেবে নিলে, যখন মূল টেমপ্লেট ভলিউম 20ul হয়, তখন 25ul 40x হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার যোগ করা হয়, এবং তারপর নিউক্লিজ-মুক্ত জল 55ul 100ul এর মোট আয়তনে যোগ করা হয়।

40x হলুদ টেমপ্লেট ডাইলুশন বাফার এখন 10x।একটি 20ul ডিলিউশন ডিলিউশন বাফারে পাতলা টেমপ্লেটের 2ul যোগ করুন এবং চূড়ান্ত 40× হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার হল 1x।উপসংহারে, চূড়ান্ত qPCR সিস্টেমে হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার 1x হওয়া উচিত।

বিঃদ্রঃ:যদি টেমপ্লেটটি পাতলা করার প্রয়োজন না হয়, বা যদি G3362-2-এর টেমপ্লেট diluent ব্যবহার না করা হয়, আপনি এই পদক্ষেপটি উপেক্ষা করতে পারেন।

2. 2×Universal Blue GSK Green qPCR মাস্টার মিক্স :: সম্পর্কে qPCR প্রতিক্রিয়া সিস্টেমের সুপারিশ করুন

কসাধারণত, 0.2um এর চূড়ান্ত ঘনত্বের সাথে একটি ভাল পরিবর্ধন প্রভাব প্রাপ্ত করা যেতে পারে।প্রতিক্রিয়া কর্মক্ষমতা খারাপ হলে, প্রাইমারের ঘনত্ব 0.2-1.0um এর পরিসরে সামঞ্জস্য করা যেতে পারে।

খ.টেমপ্লেট সংযোজনের পরিমাণ টেমপ্লেট সমাধানে লক্ষ্য জিনের অনুলিপি নম্বরের সাথে পরিবর্তিত হয় এবং টেমপ্লেট সংযোজনের উপযুক্ত পরিমাণ গ্রেডিয়েন্ট ডিলিউশন দ্বারা আলোচনা করা হয়।20ul প্রতিক্রিয়া পদ্ধতিতে টেমপ্লেট ডিএনএর সর্বোত্তম সংযোজন পরিমাণ ছিল 100 এনজির কম।যখন RT-PCR প্রতিক্রিয়ার cDNA (RT প্রতিক্রিয়া সমাধান) টেমপ্লেট হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল, তখন যোগের পরিমাণ PCR প্রতিক্রিয়া সমাধানের মোট আয়তনের 10% এর বেশি হওয়া উচিত নয়।

3. পিসিআর প্রতিক্রিয়া পদ্ধতি (যন্ত্র অনুযায়ী সামঞ্জস্য করা যেতে পারে):

একটি: যদি পরিবর্ধনের নির্দিষ্টতা উন্নত করার প্রয়োজন হয়, তবে দ্বি-পদক্ষেপ পদ্ধতি বা অ্যানিলিং তাপমাত্রা ব্যবহার করা যেতে পারে;পরিবর্ধন দক্ষতা উন্নত করতে, একটি তিন-পদক্ষেপ পদ্ধতি বা এক্সটেনশন সময় ব্যবহার করা যেতে পারে।

বিঃদ্রঃ:

1. RNase দূষণ এড়াতে অপারেশনের সময় ডিসপোজেবল গ্লাভস পরুন।

2. বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন পণ্যগুলি অল্প সময়ের জন্য -20℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে।যদি দীর্ঘমেয়াদী সঞ্চয়ের প্রয়োজন হয়, বারবার জমাট বাঁধা-গলে যাওয়া চক্র এড়াতে প্যাকিংয়ের পরে -80℃ এ সংরক্ষণ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

3. যদি টেমপ্লেটটি ইউক্যারিওটিক উত্সের হয়, তাহলে এটিকে অলিগো (dT)18 প্রাইমার নির্বাচন করার এবং পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের cDNA-এর সর্বোচ্চ ফলন পেতে ইউক্যারিওটিক mRNA-এর 3' পলি এ টেলের সাথে যুক্ত করার পরামর্শ দেওয়া হয়।

4. প্রোক্যারিওটিক RNA-এর বিপরীত ট্রান্সক্রিপশনের জন্য, র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমার বা জিন স্পেসিফিক প্রাইমার ব্যবহার করা উচিত।

5. র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমারের ব্যাপক প্রযোজ্যতা রয়েছে এবং এটি mRNA, rRNA, tRNA, ছোট RNA এবং lncRNA টেমপ্লেটের জন্য উপযুক্ত।

6. যদি বিপরীত ট্রান্সক্রিপশনটি qPCR অ্যাস দ্বারা অনুসরণ করা হয়, Oligo (dT)18 প্রাইমার এবং র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমার মিশ্রিত করা যেতে পারে যাতে mRNA এর সমস্ত অঞ্চলে সিডিএনএ সংশ্লেষণ দক্ষতা একই হয়, যা পরিমাণগত ফলাফলের সত্যতা এবং পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা উন্নত করতে সহায়তা করে।

7. যদি পরবর্তী qPCR প্রাইমারগুলি এক্সন জুড়ে ডিজাইন করা হয়, তাহলে জিনোম অপসারণের পদক্ষেপটি বাদ দেওয়া যেতে পারে।

প্রাইমার ডিজাইনের নীতিগুলি:

1. পরিবর্ধন পণ্যের দৈর্ঘ্য 80-300 bp এর মধ্যে হওয়া বাঞ্ছনীয়;

2. প্রাইমার দৈর্ঘ্য: 18-25 bp;

3. প্রাইমারগুলিতে বেস G+C এর বিষয়বস্তু 40%-60% এর মধ্যে হওয়া উচিত;

4. ফরোয়ার্ড প্রাইমার এবং রিভার্স প্রাইমারের মধ্যে Tm মানের পার্থক্য 2℃-এর কম, এবং 58-62℃-এর মধ্যে Tm মান সর্বোত্তম;

5. বেস বিতরণের এলোমেলোতা;

6. প্রাইমারগুলিতে স্ব-পরিপূরক ক্রম না থাকাই ভাল, অন্যথায় তারা একটি সেকেন্ডারি হেয়ারপিন গঠন তৈরি করবে;

7. দুটি প্রাইমারের মধ্যে 4টির বেশি পরিপূরক বা সমজাতীয় বেস থাকা উচিত নয়, অন্যথায় প্রাইমার ডাইমার গঠিত হবে, বিশেষ করে 3' শেষে পরিপূরক ওভারল্যাপ;

8. প্রাইমারের 3' টার্মিনাল বেস জি বা সি হওয়ার পরামর্শ দেওয়া হয়;

9. NCBI তুলনা ফলাফলে অন্য কোন অ-নির্দিষ্ট পণ্য পাওয়া যায়নি।

সাধারণ সমস্যা এবং সমাধান:

আপনার যদি 40×ইয়েলো টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফারের সাথে 2×Universal Blue GSK Green qPCR মাস্টার মিক্স সম্পর্কে আরও তথ্যের প্রয়োজন হয়, অনুগ্রহ করে আমাদের অনলাইনে জানান, ধন্যবাদ।