|
পণ্যের বিবরণ:
|
| পণ্যের নাম: | qPCR | সংগ্রহস্থল তাপমাত্রা: | -20 °সে |
|---|---|---|---|
| সিডিএনএ সংশ্লেষণের জন্য শক্তিশালী এবং সক্রিয়: | 55 ডিগ্রি সেলসিয়াস পর্যন্ত। | আবেদন: | পিসিআর |
| আয়তন: | 1 মিলি | বিপরীত প্রতিলিপি: | তাপমাত্রা পরিসীমা (42-60 ডিগ্রি সেলসিয়াস) |
| লক্ষণীয় করা: | ইউনিভার্সাল তাকমান মাল্টিপ্লেক্স QPCR,TaqMan মাল্টিপ্লেক্স QPCR বায়োকেমিক্যাল রিএজেন্ট,1ml TaqMan মাল্টিপ্লেক্স QPCR |
||
ইউনিভার্সাল TaqMan মাল্টিপ্লেক্স qPCR মাস্টার মিশ্রণ
প্রাইমার ডিজাইনের নীতিগুলি:
1. পরিবর্ধন পণ্যের দৈর্ঘ্য 80-300 bp এর মধ্যে হওয়া বাঞ্ছনীয়;
2. প্রাইমার দৈর্ঘ্য: 18-25 bp;
3. প্রাইমারগুলিতে বেস G+C এর বিষয়বস্তু 40%-60% এর মধ্যে হওয়া উচিত;
4. ফরোয়ার্ড প্রাইমার এবং রিভার্স প্রাইমারের মধ্যে Tm মানের পার্থক্য 2℃-এর কম, এবং 58-62℃-এর মধ্যে Tm মান সর্বোত্তম;
5. বেস বিতরণের এলোমেলোতা;
6. প্রাইমারগুলিতে স্ব-পরিপূরক ক্রম না থাকাই ভাল, অন্যথায় তারা একটি সেকেন্ডারি হেয়ারপিন গঠন তৈরি করবে;
7. দুটি প্রাইমারের মধ্যে 4টির বেশি পরিপূরক বা সমজাতীয় বেস থাকা উচিত নয়, অন্যথায় প্রাইমার ডাইমার গঠিত হবে, বিশেষ করে 3' শেষে পরিপূরক ওভারল্যাপ;
8. প্রাইমারের 3' টার্মিনাল বেস জি বা সি হওয়ার পরামর্শ দেওয়া হয়;
9. NCBI তুলনা ফলাফলে অন্য কোন অ-নির্দিষ্ট পণ্য পাওয়া যায়নি।
ইউনিভার্সাল টাকম্যান মাল্টিপ্লেক্স কিউপিসিআর মাস্টার মিক্সের পরিচিতি:
এই পণ্যটি জিএসকে গ্রীন আই চিমেরিক ফ্লুরোসেন্স পদ্ধতি ব্যবহার করে qPCR-এর জন্য একটি 2x প্রিমিক্স সমাধান।মূল উপাদান, তাক ডিএনএ পলিমারেজ, একটি তাপ-সক্রিয় ডিএনএ পলিমারেজ অ্যান্টিবডি পদ্ধতি দ্বারা অবরুদ্ধ, যা নিম্ন তাপমাত্রার পরিস্থিতিতে অনির্দিষ্ট পরিবর্ধনকে কার্যকরভাবে বাধা দিতে পারে।ইতিমধ্যে, qPCR-এর জন্য অপ্টিমাইজ করা প্রতিক্রিয়া বাফারের সাথে মিলিত, Taq DNA পলিমারেজ উচ্চ নির্দিষ্টতা এবং সংবেদনশীলতা qPCR প্রতিক্রিয়ার জন্য খুব উপযুক্ত।একটি বিস্তৃত পরিমাণগত এলাকায় একটি ভাল স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা পাওয়া যেতে পারে, যা লক্ষ্য জিনের পরিমাণগত বিশ্লেষণের জন্য সঠিক, পুনরুত্পাদনযোগ্য এবং নির্ভরযোগ্য।একই সময়ে, এই পণ্যটিতে একটি বিশেষ ROX প্যাসিভ রেফারেন্স ডাই রয়েছে যা সমস্ত qPCR যন্ত্রে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত, এবং বিভিন্ন যন্ত্রে ROX ঘনত্ব সামঞ্জস্য করার প্রয়োজন নেই৷প্রিমিক্সে নীল রঞ্জক যোগ করা হয়, যার নমুনা যোগ করার ট্রেসার প্রভাব রয়েছে এবং একই সময়ে হলুদ টেমপ্লেট ডাইলুয়েন্ট প্রদান করা হয়।যখন টেমপ্লেটটি হলুদ টেমপ্লেট ডাইলুয়েন্ট দিয়ে মিশ্রিত করা হয় এবং নীল প্রতিক্রিয়া প্রিমিক্সে যোগ করা হয়, তখন রঙ নীল থেকে সবুজে পরিবর্তিত হয়, যা প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রক্রিয়ার প্রস্তুতিতে একটি ট্রেসার ভূমিকা পালন করতে পারে এবং ফুটো বা অপব্যবহার রোধ করতে পারে।নীল এবং হলুদ রঙের বর্ণালী কিউপিসিআর রঞ্জকগুলির সাথে ওভারল্যাপ করে না এবং প্রতিক্রিয়া ফলাফলকে প্রভাবিত করে না।
অ্যাস প্রোটোকল / পদ্ধতি সম্পর্কেইউনিভার্সাল TaqMan মাল্টিপ্লেক্স qPCR মাস্টার মিশ্রণ:
1. (ঐচ্ছিক) টেমপ্লেট পাতলা করা:
এই কিটটি একটি 40x ইয়েলো টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার প্রদান করে, একটি 40-গুণ মিশ্রিত হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন যা তরলের রঙ পরিবর্তন করে qPCR প্রতিক্রিয়া তরলে টেমপ্লেট যোগ করা হয়েছে কিনা তা সঠিকভাবে নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।একটি উদাহরণ হিসাবে 20ul qPCR প্রতিক্রিয়া পদ্ধতি গ্রহণ করে, 20ul qPCR প্রতিক্রিয়া সমাধানে যোগ করা তরল টেমপ্লেট পরিমাণ অনুযায়ী, মূল টেমপ্লেটের সংশ্লিষ্ট তরল পদ্ধতিটি নিম্নলিখিত টেবিলে উল্লেখ করা যেতে পারে (উদাহরণ হিসাবে 100ul এ পাতলা করা আসল টেমপ্লেটটি গ্রহণ করা) ):
| 20ul qPCR প্রতিক্রিয়া সমাধান(ul) এ পাতলা টেমপ্লেট যোগ করুন | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 100ul টেমপ্লেট ডিলিউশন সিস্টেমে (ul) 40x হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার যোগ করুন | 50 | 25 | 16.7 | 12.5 | 10 | ৮.৪ | 7.2 | 6.3 |
| প্রাথমিক টেমপ্লেটে (ul) 100ul টেমপ্লেট ডিলিউশন সিস্টেম যোগ করুন | এক্স | এক্স | এক্স | এক্স | এক্স | এক্স | এক্স | এক্স |
| নিউক্লিজ যোগ করার পরিমাণ - বিনামূল্যে জল(ul) | 50-x | 75-এক্স | 83.3-x | 87.5-x | 90-x | 91.6-x | 92.8-x | 93.7-x |
উদাহরণ:
2ul diluted টেমপ্লেট 20ul qPCR প্রতিক্রিয়া সিস্টেমে যোগ করা উচিত।
100ul টেমপ্লেট ডিলিউশন সিস্টেমকে উদাহরণ হিসেবে নিলে, যখন মূল টেমপ্লেট ভলিউম 20ul হয়, তখন 25ul 40x হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার যোগ করা হয়, এবং তারপর নিউক্লিজ-মুক্ত জল 55ul 100ul এর মোট আয়তনে যোগ করা হয়।
40x হলুদ টেমপ্লেট ডাইলুশন বাফার এখন 10x।একটি 20ul ডিলিউশন ডিলিউশন বাফারে পাতলা টেমপ্লেটের 2ul যোগ করুন এবং চূড়ান্ত 40× হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার হল 1x।উপসংহারে, চূড়ান্ত qPCR সিস্টেমে হলুদ টেমপ্লেট ডিলিউশন বাফার 1x হওয়া উচিত।
ইউনিভার্সাল টাকম্যান মাল্টিপ্লেক্স কিউপিসিআর মাস্টার মিক্সের পণ্যের তথ্য:
| পণ্যের নাম | পণ্য সনাক্তকরণ | মডেল |
| ইউনিভার্সাল TaqMan মাল্টিপ্লেক্স qPCR মাস্টার মিশ্রণ | GS-MBP0044-01 | 1 মিলি |
| GS-MBP0044-05 | 5×1 মিলি | |
| GS-MBP0044-15 | 15×1 মিলি |
ইউনিভার্সাল টাকম্যান মাল্টিপ্লেক্স কিউপিসিআর মাস্টার মিক্সের সাথে স্টোরেজ এবং হ্যান্ডলিং শর্ত:
ভেজা বরফ ব্যাগ পরিবহন;-20 ℃ তাপমাত্রায় সংরক্ষিত, 12 মাসের জন্য বৈধ।
বিঃদ্রঃ:যদি টেমপ্লেটটি পাতলা করার প্রয়োজন না হয়, বা যদি G3362-2-এর টেমপ্লেট diluent ব্যবহার না করা হয়, আপনি এই পদক্ষেপটি উপেক্ষা করতে পারেন।
2.পিসিআর প্রতিক্রিয়া পদ্ধতি (যন্ত্র অনুযায়ী সামঞ্জস্য করা যেতে পারে):
একটি: যদি পরিবর্ধনের নির্দিষ্টতা উন্নত করার প্রয়োজন হয়, তবে দ্বি-পদক্ষেপ পদ্ধতি বা অ্যানিলিং তাপমাত্রা ব্যবহার করা যেতে পারে;পরিবর্ধন দক্ষতা উন্নত করতে, একটি তিন-পদক্ষেপ পদ্ধতি বা এক্সটেনশন সময় ব্যবহার করা যেতে পারে।
বিঃদ্রঃ:
1. RNase দূষণ এড়াতে অপারেশনের সময় ডিসপোজেবল গ্লাভস পরুন।
2. বিপরীত ট্রান্সক্রিপশন পণ্যগুলি অল্প সময়ের জন্য -20℃ এ সংরক্ষণ করা যেতে পারে।যদি দীর্ঘমেয়াদী সঞ্চয়ের প্রয়োজন হয়, বারবার জমাট বাঁধা-গলে যাওয়া চক্র এড়াতে প্যাকিংয়ের পরে -80℃ এ সংরক্ষণ করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
3. যদি টেমপ্লেটটি ইউক্যারিওটিক উত্সের হয়, তাহলে এটিকে অলিগো (dT)18 প্রাইমার নির্বাচন করার এবং পূর্ণ-দৈর্ঘ্যের cDNA-এর সর্বোচ্চ ফলন পেতে ইউক্যারিওটিক mRNA-এর 3' পলি এ টেলের সাথে যুক্ত করার পরামর্শ দেওয়া হয়।
4. প্রোক্যারিওটিক RNA-এর বিপরীত ট্রান্সক্রিপশনের জন্য, র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমার বা জিন স্পেসিফিক প্রাইমার ব্যবহার করা উচিত।
5. র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমারের ব্যাপক প্রযোজ্যতা রয়েছে এবং এটি mRNA, rRNA, tRNA, ছোট RNA এবং lncRNA টেমপ্লেটের জন্য উপযুক্ত।
6. যদি বিপরীত ট্রান্সক্রিপশনটি qPCR অ্যাস দ্বারা অনুসরণ করা হয়, Oligo (dT)18 প্রাইমার এবং র্যান্ডম হেক্সামার প্রাইমার মিশ্রিত করা যেতে পারে যাতে mRNA এর সমস্ত অঞ্চলে সিডিএনএ সংশ্লেষণ দক্ষতা একই হয়, যা পরিমাণগত ফলাফলের সত্যতা এবং পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা উন্নত করতে সহায়তা করে।
7. যদি পরবর্তী qPCR প্রাইমারগুলি এক্সন জুড়ে ডিজাইন করা হয়, তাহলে জিনোম অপসারণের পদক্ষেপটি বাদ দেওয়া যেতে পারে।
সাধারণ সমস্যা এবং সমাধান:
| সমস্যার বর্ণনা | সম্ভাব্য কারণ | সমাধান |
| প্রতিক্রিয়ার শেষে, কোন পরিবর্ধন বক্ররেখা উপস্থিত হয় না বা সিটি মান খুব দেরিতে উপস্থিত হয় | টেমপ্লেট ঘনত্ব খুব কম | একাধিক টেমপ্লেট তরলীকরণ কমাতে পরীক্ষাটি পুনরাবৃত্তি করুন এবং নমুনার ঘনত্ব অজানা থাকলে সর্বোচ্চ ঘনত্ব থেকে শুরু করুন |
| টেমপ্লেট অবক্ষয় | টেমপ্লেটটি আবার প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং পরীক্ষাটি পুনরাবৃত্তি হয়েছিল | |
| সিস্টেমে পিসিআর ইনহিবিটার আছে | সাধারণত, টেমপ্লেটটি বহন করা হয়, টেমপ্লেটের তরল অনুপাত বাড়ানো হয় বা উচ্চ বিশুদ্ধতা সহ টেমপ্লেটটি পুনরায় প্রস্তুত করা হয় এবং পুনরাবৃত্তি করা হয় | |
| প্রাইমার ক্ষয় হতে পারে | যে প্রাইমারগুলি দীর্ঘকাল ধরে ব্যবহার করা হয়নি সেগুলিকে প্রথমে PAGE ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা অখণ্ডতার জন্য পরীক্ষা করা উচিত যাতে অবক্ষয়ের সম্ভাবনা নাকচ করা যায়। | |
| কম পরিবর্ধন দক্ষতা | প্রাইমারের ঘনত্ব বৃদ্ধি করুন, একটি তিন-পদক্ষেপ পরিবর্ধন পদ্ধতি চেষ্টা করুন বা প্রাইমারটিকে পুনরায় ডিজাইন করুন | |
| পরিবর্ধন পণ্য খুব দীর্ঘ | পরিবর্ধন পণ্যের দৈর্ঘ্য 80-300 bp পরিসরে নিয়ন্ত্রিত ছিল | |
| ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ সংকেত দেখায় | প্রতিক্রিয়া সিস্টেম দূষণ | প্রথমত, ফাঁকা নিয়ন্ত্রণ জল প্রতিস্থাপন করা উচিত।যদি একই অবস্থা এখনও ঘটে, তাহলে প্রাইমার, অ্যাসপিরেটর এবং পিসিআর টিউবগুলি প্রতিস্থাপন করা উচিত বা একটি নতুন মাস্টার মিক্স শুরু করা উচিত।অ্যারোসল দূষণ কমাতে একটি সুপার ক্লিন টেবিলে প্রতিক্রিয়া সিস্টেম প্রস্তুত করা হয় |
| প্রাইমার ডাইমারের মতো অ-নির্দিষ্ট পরিবর্ধন প্রদর্শিত হয় |
সাধারণত, 35 চক্রের পরে পরিবর্ধন পণ্যগুলি ফাঁকা নিয়ন্ত্রণে উপস্থিত হওয়া স্বাভাবিক, যা গলানো বক্ররেখা দিয়ে বিশ্লেষণ করা উচিত। প্রাইমার পুনরায় ডিজাইন করুন, প্রাইমারের ঘনত্ব সামঞ্জস্য করুন বা পিসিআর প্রতিক্রিয়া পদ্ধতি অপ্টিমাইজ করুন |
|
| গলে যাওয়া বক্ররেখার একাধিক চূড়া রয়েছে | প্রাইমার ডিজাইন খারাপ | প্রাইমার ডিজাইনের নীতি অনুসারে নতুন প্রাইমারটি পুনরায় ডিজাইন করা হয়েছিল |
| প্রাইমারের ঘনত্ব খুব বেশি | প্রাইমারের ঘনত্ব যথাযথভাবে হ্রাস করুন | |
| সিডিএনএ টেমপ্লেটে জিনোমিক দূষণ রয়েছে | নিষ্কাশিত আরএনএ দ্রবণটি ডিএনএ এনজাইম ব্যবহার করে হজম করা হয়, যেমন ডিএসডিনেস, জিনোমিক দূষণ অপসারণ করতে বা ট্রান্সিন্ট্রন প্রাইমার ডিজাইন করতে। | |
| পরীক্ষার দুর্বল প্রজননযোগ্যতা | নমুনা যোগ করার ত্রুটি বড় |
সঠিক পাইপেট ব্যবহার, উচ্চ মানের স্তন্যপান মাথা সঠিক পাইপেট সঙ্গে; উচ্চ পাতলা টেমপ্লেট, নমুনা ত্রুটি কমাতে বড় ভলিউম টেমপ্লেট যোগ করা; কিউপিসিআর-এর প্রতিক্রিয়ার পরিমাণ বাড়ানো হয়েছিল |
| টেমপ্লেট ঘনত্ব খুব কম | টেমপ্লেটের পাতলা করার সময় কমাতে পরীক্ষার পুনরাবৃত্তি করুন | |
| qPCR যন্ত্রের বিভিন্ন স্থানে তাপমাত্রার বিচ্যুতি | qPCR যন্ত্র নিয়মিত ক্যালিব্রেট করুন | |
| পরিবর্ধন বক্ররেখা মসৃণ নয় | ফ্লুরোসেন্স সংকেত খুব দুর্বল, সিস্টেম সংশোধনের পরে উত্পাদিত হয় |
নিশ্চিত করুন যে মাস্টার মিক্সে প্রিমিক্স করা রঞ্জকগুলি খারাপ না হয়; ভাল qPCR ভোগ্য সামগ্রী সংগ্রহ করতে ফ্লুরোসেন্ট সংকেত প্রতিস্থাপন করুন |
| অ্যামপ্লিফিকেশন কার্ভ ব্রেক বা স্লিপ | টেমপ্লেটের ঘনত্ব বেশি ছিল এবং বেসলাইন এন্ডপয়েন্টের মান সিটি মানের চেয়ে বেশি ছিল | বেসলাইন এন্ডপয়েন্ট (Ct মান -3) হ্রাস করা হয়েছিল এবং ডেটা পুনরায় বিশ্লেষণ করা হয়েছিল |
| পৃথক ওয়েলস এর প্রশস্তকরণ বক্ররেখা হঠাৎ তীব্রভাবে নেমে গেছে | প্রতিক্রিয়া নল মধ্যে বুদবুদ আছে |
নিশ্চিত করুন যে MIX সম্পূর্ণরূপে দ্রবীভূত হয়েছে, এবং সমানভাবে ঘূর্ণায়মান এবং দোলাবেন না; নমুনা যোগ করার পরে, বুদবুদগুলি হালকা ইলাস্টিক দিয়ে সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা সরানো হয়। বুদবুদ অপসারণ করার জন্য প্রাক-ডিনাচুরেশন সময় 10 মিনিট পর্যন্ত বাড়ানো হয়েছিল |
ইউনিভার্সাল TaqMan মাল্টিপ্লেক্স qPCR মাস্টার মিক্স সম্পর্কে আপনার আরও তথ্যের প্রয়োজন হলে, অনুগ্রহ করে আমাদের অনলাইনে জানান, ধন্যবাদ।
ব্যক্তি যোগাযোগ: Ms Kris
টেল: +8613049739311
