দ্রুত ডিএনএ হজম 5-15 মিনিট এনজাইম BsaI বায়োকেমিক্যাল রিএজেন্ট সিই অনুমোদিত

এনজাইম BsaI

এনজাইমগুলি 5-15 মিনিটের মধ্যে দ্রুত ডিএনএ হজমের জন্য প্রকৌশলী সীমাবদ্ধ এনজাইমের একটি সিরিজ।এনজাইমগুলি প্লাজমিড, জিনোমিক এবং ভাইরাল ডিএনএ পাশাপাশি পিসিআর পণ্যগুলি হজম করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।সমস্ত এনজাইম সর্বজনীন বাফারে উচ্চতর কার্যকলাপ দেখায়, তাই এনজাইমেটিক হজম প্রতিক্রিয়া সিস্টেমকে সরলীকৃত করে।অধিকন্তু, এনজাইমগুলি চমৎকার এনজাইম অপ্রয়োজনীয়তা প্রদান করে, যার ফলে সাবস্ট্রেট অতিরিক্ত বা কঠিন টেমপ্লেট সহজে হজম হয়।

শিপিং এবং স্টোরেজ

উপাদানগুলি আইস প্যাকের সাথে পাঠানো হয় এবং 2 বছরের জন্য -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা যেতে পারে।

কাটিং সাইট

5'-GGTCTC(N)1↓-3'

3'-CCAGAG(N)5↑-5'

প্রস্তাবিত প্রতিক্রিয়া শর্তাবলী

1× FuniCut™ বাফার;37℃ এ ইনকিউবেট করুন।

তাপ নিষ্ক্রিয়করণ

20 মিনিটের জন্য 80℃ এ ইনকিউবেশন।

মান নিয়ন্ত্রণ

1. কার্যকলাপ সংজ্ঞা:1 μg pPIC9K DNA সম্পূর্ণরূপে 1 μL এনজাইমের সাথে 15 মিনিটের মধ্যে 37℃ এ 20 μL এর মোট বিক্রিয়া ভলিউমে পরিপাক হয়েছিল।

2. দীর্ঘায়িত ইনকিউবেশন/স্টার অ্যাকটিভিটি অ্যাসে:1 μg pPIC9K DNA এর কোন সনাক্তযোগ্য অবক্ষয় নেই নিউক্লিয়াস দূষণের কারণে বা তারার কার্যকলাপ 1 μL FuniCut™ BsaI 37℃ এ 3 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশনের সময় ঘটেছিল।দীর্ঘতর ইনকিউবেশনের ফলে তারার কার্যকলাপ হতে পারে।

3. লিগেশন এবং রিক্লেভেজ (এল/আর) অ্যাস:সর্বোত্তম অবস্থায় 1μL এনজাইম দিয়ে হজম করার পর, হজম থেকে রিসাইকেল পণ্যটি 22℃ তাপমাত্রায় T4 DNA Ligase-এর অধীনে বন্ধ করা যেতে পারে।বন্ধন পণ্য এনজাইম দ্বারা recleavage করা যেতে পারে.

4. অনির্দিষ্ট এন্ডোনিউক্লিজ কার্যকলাপ:1 μL এনজাইমের সাথে 1 μg সুপারকোয়েলড প্লাজমিড ডিএনএ 37℃ এ 4 ঘন্টার জন্য ইনকিউবেশনের ফলে সুপারকোয়েলড অবস্থার কোন পরিবর্তন হয়নি।

নির্দেশনা

1. বিভিন্ন ডিএনএর দ্রুত হজমের জন্য প্রোটোকল

1.1 নির্দেশিত ক্রমে বরফের উপর নিম্নলিখিত প্রতিক্রিয়া উপাদানগুলিকে একত্রিত করুন:

[দ্রষ্টব্য]: *বিশুদ্ধ পিসিআর পণ্যের জন্য।10× এর পরিমাণFuniCut™ বাফারঅপরিশোধিত পিসিআর পণ্যগুলিতে অবশিষ্ট আয়নিক শক্তির কারণে 2 μL এ হ্রাস পেতে পারে।পিসিআর পণ্য ক্লোনিংয়ের জন্য যখন পিসিআর পণ্য ব্যবহার করা হবে তখন হজমের আগে শুদ্ধ করার পরামর্শ দেওয়া হয়েছিল।

1.2 আলতোভাবে মিশ্রিত করুন (ঘূর্ণি করবেন না) এবং নীচে ঘুরুন।

1.3 15 মিনিট (প্লাজমিড ডিএনএ) বা 15-30 মিনিট (পিসিআর পণ্য) বা 30-60 মিনিট (জিনোমিক ডিএনএ) এর জন্য 37℃ এ ইনকিউবেট করুন।

1.4 ঐচ্ছিক: 80℃ এ 20 মিনিট গরম করে এনজাইম নিষ্ক্রিয় করুন।

2. DNA এর ডাবল এবং মাল্টিপল হজম

2.1 প্রতিটি এনজাইমের 1 μL ব্যবহার করুন এবং প্রতিক্রিয়া পরিস্থিতি যথাযথভাবে স্কেল করুন।

2.2 বিক্রিয়া মিশ্রণে এনজাইমগুলির সম্মিলিত আয়তন মোট বিক্রিয়ার আয়তনের 1/10 এর বেশি হওয়া উচিত নয়।

2.3 যদি এনজাইমগুলির বিভিন্ন প্রতিক্রিয়ার তাপমাত্রার প্রয়োজন হয়, তাহলে সেই এনজাইমটি দিয়ে শুরু করুন যার জন্য কম তাপমাত্রার প্রয়োজন হয়, তারপর দ্বিতীয় এনজাইমটি যোগ করুন এবং উচ্চ তাপমাত্রায় ইনকিউবেট করুন।

3. প্লাজমিড ডিএনএ হজম প্রতিক্রিয়া বৃদ্ধি করা

[বিঃদ্রঃ]: একটি জল তাপস্থাপক, ধাতব তাপস্থাপক বা বালি তাপস্থাপক মধ্যে ইনকিউবেশন.মোট প্রতিক্রিয়া ভলিউম 20 μL ছাড়িয়ে গেলে ইনকিউবেশন সময় বাড়ান।

ডিএনএ-তে স্বীকৃতি সাইটের সংখ্যা